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由于蛋白质中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质溶液在 280 nm 处具有紫外吸收峰。 在一定的浓度范围内,蛋白质溶液在该波长下的吸光度与其浓度成正比,因此该特性可用于定量蛋白质。
该方法快速、简单,不消耗样品,低浓度盐不干扰测定,可测定为蛋白质溶液。
由于蛋白质的紫外吸收峰值经常因pH值变化而改变,因此在应用这种方法时应注意溶液的pH值。 最佳样品的pH值与标准曲线制定时的pH值一致。
该方法对于酪氨酸和色氨酸含量与标准蛋白质相差较大的蛋白质的测定误差较大,因此适用于酪氨酸、色氨酸等与标准蛋白质氨基酸含量相近的样品的测定。 如果样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质,就会有很大的干扰。 例如,与核酸混合,核酸可以吸收波长为280nm的紫外线,但它吸收260nm的紫外线更强。 相反,对于蛋白质,280 nm的紫外吸收值大于260 nm的紫外吸收值。
280 260吸收差规则可用于正确校正核酸对蛋白质浓度测定的干扰作用。
在蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外线的特性。 只要存在共轭双键等不饱和键,蛋白质分子就可以溶解到一定浓度的溶液中,然后用紫外吸光度测定。
如果你有任何问题,可以直接问我。 参考。
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只要能做成溶液,就可以测量!
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