了解如何通过紫外分光光度法测量蛋白质含量

nm吸收法。

使用标准曲线法进行测定。 制备浓度为mg mL的标准蛋白质溶液。 常用的标准蛋白是牛血清白蛋白（BSA）。

nm 和 260 nm 吸收差法。

核酸对紫外线的吸收很强，在280nm处比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260nm处的吸收更强，其吸收峰在260nm左右。 核酸在260 nm处的消光系数是280 nm处的两倍。 另一方面，蛋白质的紫外吸光度值为 280 nm，大于 260 nm。

nm 与 225 nm 吸收差值法。

当由于含量低而无法在280nm测量蛋白质的稀溶液时，可以通过215nm和225nm的吸收值之差，用标准曲线法确定稀蛋白质溶液的浓度。

4.肽键测定。

蛋白质溶液在238nm处的光吸收强度与肽键的数量成正比。 因此，可以用标准蛋白溶液制备一系列已知浓度的50 500 mg mL mL蛋白质溶液，并在238 nm处测定光吸收值A238，并以A238为纵坐标，以蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。 未知样品的浓度可以从标准曲线中获得。

普通紫外分光光度法用于测量蛋白质含量。 由于蛋白质一般含有芳香族氨基酸（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸），且在近紫外区域具有吸收紫外线的性质，因此可以根据这一原理确定蛋白质的浓度。

只是一个提醒。

由于核酸的最大吸收波长为 260 nm，因此有必要考虑到蛋白质在 280 nm 处

当您测量 260 和 280 波长时，您需要查看它们的比率。

然后测定样品的纯度。

具体方法见生化实验书。